關於明膠酶譜法試劑盒脫色液配方的注意事項

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本公司銷售的基質金屬蛋白酶MMP2/MMP9明膠酶譜試劑盒☁▩◕✘▩，其中脫色液配方│▩·☁：冰醋酸:甲小型冷熱衝擊試驗機醇:水＝7:5:88（V:V:V）☁▩◕✘▩，很多老師不明年這裡面的冰醋酸是甚麼☁▩◕✘▩，我們今印花牢度水洗試驗機天給大家講授1下↟₪。
這個冰醋酸不是醋酸也不是乙酸☁▩◕✘▩，冰醋酸也叫冰乙酸☁▩◕✘▩，就是純的無水乙酸↟₪。不過我們選擇常規的98%乙酸也是可以的↟₪。

檢測步驟│▩·☁：
1. 製備含 MMP 底物蛋白的 SDS-PAGE 凝膠│▩·☁：推薦分離膠濃度為 8%↟₪。依照標準程式製備 SDS- PAGE 凝膠↟₪。將 10 ×液晶數顯式萬電磁振動臺縮水率試驗機電磁振動試驗機能試驗機; substrate G 熔化☁▩◕✘▩，並 90 ºC 加熱 5 分鐘↟₪。分別在濃縮膠和分離膠中額外加 入 10 × substrate G 並使ya1000b壓力試驗機之稀釋 10 倍☁▩◕✘▩，混勻後加入過硫酸銨和 TEMED☁▩◕✘▩，等待凝膠聚合↟₪。
2. 待測樣品 1:1 稀釋於 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer (用完後可自行配製│▩·☁：4%電線扭結試驗機 SDS, 100 mM Tris-Cl耐光耐候試驗機 pH6.8, 20%安全鞋國標耐折試驗機 glycerol, 0.02% bromophno靜力試驗機l blue)☁▩◕✘▩，混合後直接上樣↟₪。切大電流起弧試驗機勿加熱變性☁▩◕✘▩，並且僅 使用不加還原劑的上樣緩衝液↟₪。可透過預實驗肯定加樣量☁▩◕✘▩，使用普通蛋床墊綜合試驗機白預染 Marker便可↟₪。陽 性對比(可選步驟)│▩·☁：可取人↟·││☁、小鼠↟·││☁、大鼠或兔 100µl 全血與 100&鑽桿扭矩試驗機micro;l 2 × SDS-PAGE no包裝斜面衝擊試驗機n-
reducing buffer 等體積混合☁▩◕✘▩，取 5⑴5µl 上樣↟₪。
3. 低電流恆流電泳☁▩◕✘▩，每塊小膠電流為 20m熱迴圈試驗機A/gel↟₪。溴酚藍跑出凝膠前沿時結束電泳↟₪。
4. 洗滌凝膠│▩·☁：取出凝膠☁▩◕✘▩，去除濃縮膠☁▩◕✘▩，放入容器內.可先用適當蒸餾水沖洗凝膠☁▩◕✘▩，然後加入10ml
1× Buffer A(用蒸餾水稀釋)☁▩◕✘▩，室溫漂洗凝膠 2 × 30 分鐘↟₪。中間換液↟₪。
5. 孵育│▩·☁：倒掉 Buffer A↟₪。加入 10 ml 1× Buffer B(蒸餾水稀釋)☁▩◕✘▩，室溫或 37ºC 孵育 1~5 小時↟₪。陽性 楔壓強度試驗機對 拉鍊綜合強力試驗散熱器水壓試驗機機照或血中的 MMP 通常 37ºC 孵育插頭引線彎曲試驗機 1 小時便可顯示↟₪。如 MMP 活性低☁▩◕✘▩，應延長孵育時間為 10 小時或 過1夜↟₪。
6. 顯色│▩·☁：倒掉 Buffer B☁▩◕✘▩，加入 SD冷熱衝擊試驗機S-PAGE 凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液（操作步驟見 SDS-PAGE 凝纖維材料拉力試驗機 催化劑試驗機膠蛋白質考馬斯亮藍染色液說明書）↟₪。凝膠的大部份區域被深染☁▩◕✘▩，在有 MMP 條帶的位置 不被染 色而構成透亮區域↟₪。透明區域的位置和範圍唆使 MMP⑵↟·││☁、MMP⑼ 的大小位置(酶譜)及 活性↟₪。陽 性對比將在 66~72 (MMP⑵)↟·││☁、92 (MMP⑼)↟·││☁、130 (proMMP⑼)↟·││☁、225 (proMMP⑼) 慢應變速率應力腐蝕拉伸試驗機kDa 位置出現透明條帶↟₪。
7. 條帶掃描│▩·☁：將凝膠放在掃描器上掃描↟₪。雖30噸電子萬能試驗機然 MMP 條帶透明☁▩◕✘▩，但凝膠背景並不是真正全黑↟₪。解決 辦法│▩·☁：可用非透射光掃描☁▩◕✘▩，或用軟體圖象處理程式調劑背景顯示為灰度顯示☁▩◕✘▩，並儘可能設定為黑色.MMP條帶則為白色☁▩◕✘▩，這類背景黑條帶白的格式是英文論文中最多見的格式↟₪。
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